Определение антибиотиков в молоке: Как определить антибиотики в молоке в домашних условиях?

Содержание

Как определить антибиотики в молоке в домашних условиях?

Даже если Вы – противник антибиотиков, Вы все равно их получаете с пищей, сами того не зная. Половина всех производимых в мире антибиотиков идет на корм скоту, что приносит баснословные прибыли и животноводам, и фармкомпаниям. Делается это не только ради лечения определенных животных, но и для того, чтобы обеспечить быстрый рост и больший размер скота. За счет антибиотиков животноводы экономят на кормах около 30%. В результате значительную дозу антибиотиков получаем и мы.

Российские фермеры кормят и лечат своих животных левомицетином, пенициллином, стрептомицином, тетрациклином и т.д. Затем производители добавляют антибиотики в процессе изготовления продуктов ради увеличения срока хранения. Вместе с молочными и мясными изделиями эти вещества попадают в организм людей, после чего пропадает чувствительность к невольно принимаемым антибиотикам, иммунитет ослабляется, развиваются аллергические реакции.

Аллергии – бич современных городских жителей, каждые 30 лет заболеваемость аллергиями увеличивается в 2 раза. Наиболее серьезное осложнение аллергии – бронхиальная астма. Согласитесь, это совсем не то, что хотел бы получить человек пьющий безобидное коровье молоко. 

Оказывается, согласно технологическому регламенту определенная доля антибиотиков официально допустима – в сотых-тысячных долях процентов. Но как понять, что нормы соблюдены, и молоко безопасно? Проверить это можно в домашних условиях и довольно просто. Достаточно оставить некоторое количество молока на ночь вне холодильника при комнатной температуре. Если молоко не скисает, значит антибиотиков в нем больше нормы.

Также можно провести эксперимент по ГОСТовской технологии. В стерильную емкость наливаем 100 мл молока, добавляем чайную ложку свежей сметаны. Через 3-4 часа смотрим на результат: если ингибиторы отсутствуют — молоко, поставленное в теплое место, превращается в простоквашу.

Точное количество антибиотиков в молоке «на глаз» определить невозможно, нужны специальные лабораторные тесты. Но главное, что нужно понять: если посторонние бактерии можно убить при термической обработке, то антибиотик из молока никаким кипячением не устранишь.

К сожалению, из молока в котором норма антибиотиков превышена не получится приготовить домашние кисломолочные продукты – полезные бактерии погибнут, даже не начав процесс ферментации. Так что, если у вас не получилось приготовить йогурт дома, то одна из возможных причин – антибиотики в молоке.

Как убрать антибиотики из молока?

К сожалению, в домашних условиях определить какой конкретно используется антибиотик в молоке не представляется возможным. Соответственно, подобрать способ нейтрализации тоже не удастся — можно нанести вред организму. Поэтому, если одним из вышеуказанных способов вы определили, что в молоке содержатся антибиотики — лучше отказаться от молока данного производителя.

По инф. ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ставропольском крае»

4sensor (Форсенсор) Тест на антибиотики в молоке 96 шт

Поиск по каталогу

Каталог товаров /
Оборудование для определения качества молока /
Тесты на определение антибиотиков в молоке /
Тесты на 2 и 4 группы антибиотиков и ингибирующих веществ с применением инкубатора (термостата)

  • Инструкция 4sensor. pdf

    786 кб, 03 августа в 07:42

  • ГОСТ Р 51600-2010 Молоко и молочные продукты. Микробиологические методы определения наличия антибиотиков.pdf

    369.6 кб, 16 октября в 09:38

  • Гост 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков.pdf

    1.4 Мб, 14 октября в 11:03

Оформить заказ

  • Производитель: Бельгия
  • Гарантия: 12 месяцев

Экспресс-тест для одновременного выявления присутствия ß-лактамов, тетрациклинов, хлорамфеникола и стрептомицинов в пробе молока. В упаковке 96 шт. Время измерения – 10 минут.

Преимущества теста

  1. Одновременное определение β-лактама, тетрациклина, стрептомицина и левомицетина
  2. Скорость – результат в течение 6 мин.
  3. Чувствительность
  4. Надежность и точность
  5. Удобство — легко выполняется на месте или в лаборатории
  6. Выгодная цена
  7. Экологическая упаковка

Принцип действия

4SENSOR (4 сенсор) – это первый и единственный тест для одновременного определения присутствия молекул антибиотиков β-лактама, тетрациклина, стрептомицина и левомицетина в пробе молока за одно исследование.

4SENSOR помогает производителям и переработчикам молока сэкономить время и сократить расходы за счет объединения четырех отдельных тестов в одной полоске.

4SENSOR — это конкурентный метод тестирования с участием специфических рецепторов и антител. Удобная форма тест-полоски делает тестирование легким, точным и экономичным. Тест может быть использован на ферме для ежедневных проверок или в лаборатории для серийного анализа проб молока.

Разработка теста проводилась в сотрудничестве с Всероссийским Научно-Исследовательским Институтом Молочной Промышленности.

ГОСТ 32219-2013 утвержден

Полезно знать

Присутствие в молоке остаточных молекул антибиотиков, таких как бета-лактам, тетрациклин, стрептомицин и хлорамфеникол, вызывает большое беспокойство у производителей и переработчиков молочной промышленности из-за последующих неблагоприятных последствий. С января 2011 были ужесточены требования к определению антибиотиков в молоке. В соответствии с новым Федеральным законом от 22.07.2010 № 163 были внесены изменения в Технический регламент на молоко и молочную продукцию.

Для соответствия этим требованиям, компания Unisensor разработала новый экспресс — тест для быстрого и одновременного обнаружения β-лактама, тетрациклина, стрептомицина и хлорамфеникола в молоке. Этот экспресс — тест не требует подготовки образца и за 10 минут выдает результата, который расшифровывается визуально или с использованием считывающего устройства. Присутствие каждого антибиотика соответствует четырем отдельным испытательным линиям. Это экспресс-тест идеально подходит для молочной промышленности в России, Белоруссии и Казахстане, а также для европейских заводов экспортирующих молоко в Таможенный союз.

Последовательность действий при работе с 4SENSOR KIT060:

1. Смешать реагент с молоком в микролунке.

2. Поместить микролунку в инкубатор.

3. Закрыть крышку и нажать кнопку «Старт»

4. Поместить тест-полоску.

Проводить инкубацию на протяжении 10 минут. 5. Расшифровать полученный результат.

Результаты

Т – тетрациклины, С – хлорамфеникол, S – стрептомицин, В – бета-лактамы, CTRL — контроль.

Визуальная интерпретация результата осуществляется сравнением интенсивности тестовой линии с контрольной линией. Если антибиотиков нет – тестовая линия проявляется сильнее по сравнению с контрольной, если антибиотики присутствуют – тестовая линия слабее контрольной.

Технические характеристики

Бета-Лактам +
Тетрациклин +
Стрептомицин +
Левомицетин +
Температура термостатирования 40°С
Время анализа 10 минут

Купить 4sensor (Форсенсор) Тест на антибиотики в молоке  96 шт можно в компании Агролаб и заказать доставку в следующие города: Абакан, Анадырь, Архангельск, Астрахань, Барнаул, Белгород, Биробиджан, Благовещенск, Брянск, Великий Новгород, Владивосток, Владикавказ, Владимир, Волгоград, Вологда, Воронеж, Горно-Алтайск, Грозный, Екатеринбург, Иваново, Ижевск, Иркутск, Йошкар-Ола, Казань, Калининград, Калуга, Кемерово, Киров, Кострома, Краснодар, Красноярск, Курган, Курск, Кызыл, Липецк, Магадан, Магас, Майкоп, Махачкала, Москва, Мурманск, Нальчик, Нарьян-Мар, Нижний Новгород, Новосибирск, Омск, Оренбург, Орёл, Пенза, Пермь, Петрозаводск, Петропавловск-Камчатский, Псков, Ростов-на-Дону, Рязань, Санкт-Петербург, Салехард, Самара, Саранск, Саратов, Севастополь, Симферополь, Смоленск, Ставрополь, Сыктывкар, Тамбов, Тверь, Томск, Тула, Тюмень, Улан-Удэ, Ульяновск, Уфа, Хабаровск, Ханты-Мансийск, Чебоксары, Челябинск, Черкесск, Чита, Элиста, Южно-Сахалинск, Якутск, Ярославль

Информация, представленная на сайте, не является публичной офертой.

Определение остаточного содержания антибиотиков в молоке и оценка риска для здоровья человека в Бангладеш

1. Всемирный экономический форум Вот сколько людей к 2050 году может убивать устойчивость к антибиотикам, если ничего не предпринимать | Всемирный экономический форум 2016 г. https://www.weforum.org/agenda/2016/09/this-is-how-many-people-will-die-from-antimicrobial-resistance-every-year-by-2050-if -nothing-is-done/ (по состоянию на 15 мая 2020 г.)

2. О’Нил Дж. 2016 г. Борьба с лекарственно-устойчивыми инфекциями во всем мире: итоговый отчет и рекомендации Обзор устойчивости к противомикробным препаратам. Лондон, Великобритания. [Академия Google]

3. Чоудхури С., Хассан М.М., Алам М., Саттар С., Бари М.С., Сайфуддин А.К.М. Остатки антибиотиков в молоке и яйцах коммерческих и местных ферм в Читтагонге, Бангладеш. Вет. Мир. 2015; 8: 467–471. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar]

4. Саттар С., Хассан М.М., Ислам С.К.МА., Алам М. , Фарук М.С. Эл, Чоудхури С. Остатки антибиотиков в мясе бройлеров и несушек в районе Читтагонг, Бангладеш. Вет. Мир. 2014;7:738–743. [Google Scholar]

5. Хассан М.М., Эль Зовалати М.Е., Лундквист О., Ярхульт Дж.Д., Хан Найем М.Р., Танзин А.З. Остаточные антимикробные агенты в пищевых продуктах животного происхождения. Тенденции Food Sci. Технол. 2021; 111: 141–150. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

6. Ислам А., Сайфуддин А.К.М., Аль Фарук А., Ислам С., Шано С., Алам М. Остатки противомикробных препаратов в тканях и яйцах кур-несушек в Читтагонге, Бангладеш. Междунар. J. Одно исцеление. 2016;2 WwwOnehealthjournalOrg [Google Scholar]

7. Landers T.F., Cohen B., Wittum T.E., Larson E.L. Обзор использования антибиотиков у сельскохозяйственных животных: перспективы, политика и потенциал. Опубл. Health Rep. 2012; 127:4–22. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

8. Кириакидес Д., Лазарис А.С., Арсеноглу К., Эммануил М., Кириакидес О. , Каванцас Н. Оценка воздействия ветеринарных антибиотиков в свинине на детей и подростков на Кипре. Еда. 2020;9[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

9. Ханна Н., Сун П., Сун К., Ли С., Ян С., Цзи С. Наличие остатков антибиотиков в различных экологических средах провинции Шаньдун в восточном Китае: его потенциал для развития резистентности и экологический и человеческий риск. Окружающая среда. Междунар. 2018;114:131–142. [PubMed] [Google Scholar]

10. ОЭСР . 2016. Antimicrobial Resistance Policy Insight.www.oecd.org/health/antimicrobial-resistance.htm [Google Scholar]

11. ВОЗ . 2011. Борьба с устойчивостью к противомикробным препаратам пищевого происхождения во всем мире с помощью комплексного эпиднадзора. https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/75198/9789241504010_rus.pdf;jsessionid=4A63D447F139E9AB75DE1EB5F9725591?sequence=1 [Google Scholar]

12. FDA . 2014. ОБЩИЙ ОТЧЕТ ЗА 2009 ГОД Противомикробные препараты, проданные или распространяемые для использования в животноводстве. [Google Scholar]

13. Боцоглу Н.А., Флетурис Д.Дж. Остатки лекарств в пищевых продуктах: Фармакология. Пищевая безопасность Анальный. 2001; 23: 312–323. [Google Scholar]

14. Европейское агентство по оценке лекарственных средств. Примечание Комитета по ветеринарным лекарственным средствам к руководству по определению периодов отмены для молока. 2020. [Google Академия]

15. Полянчук С.И., Гурзэу А.Е., Кисс Б., Джорджия Штефан М., Логин Ф. Антибиотики в окружающей среде: причины и последствия. Мед. фарм. Отчет 2020; 93: 231–240. [PMC бесплатная статья] [PubMed] [Google Scholar]

16. Zuccato E., Calamari D., Natangelo M., Fanelli R. Присутствие терапевтических препаратов в окружающей среде. Ланцет. 2000; 355:1789–1790. [PubMed] [Google Scholar]

17. Лундборг К.С., Тамханкар А.Дж. Остатки антибиотиков в окружающей среде Юго-Восточной Азии. БМЖ. 2017; 358:42–45. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

18. Hu X., Zhou Q., Luo Y. Наличие и анализ источников типичных ветеринарных антибиотиков в навозе, почве, овощах и грунтовых водах из органических растительных баз, северный Китай. Окружающая среда. Загрязн. 2010;158:2992–2998. [PubMed] [Google Scholar]

19. Тиан Л., Халил С., Байен С. Влияние термической обработки на разложение остатков антибиотиков в пищевых продуктах. крит. Преподобный Food Sci. Нутр. 2017;57:3760–3770. [PubMed] [Google Scholar]

20. Fonseca G.P., Cruz A.G., Faria J.A.F., Silva R., Moura M.R.L., Carvalho L.M.J. Остатки антибиотиков в бразильском ультрапастеризованном молоке: скрининговое исследование. Пищевая наука. Технол. 2009 г.;29:451–453. [Google Scholar]

21. Комиссия Codex Alimentarius по ветеринарным препаратам | CODEXALIMENTARIUS FAO-WHO 2018. http://www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/codex-texts/dbs/vetdrugs/veterinary-drugs/en/

22. Li N., Ho K.W.K., Ying G.G., Дэн В. Дж. Ветеринарные антибиотики в продуктах питания, питьевой воде и моче детей дошкольного возраста в Гонконге. Окружающая среда. Междунар. 2017; 108: 246–252. [PubMed] [Google Scholar]

23. Ji K., Lim Kho Y., Park Y., Choi K. Влияние пятидневной вегетарианской диеты на уровни антибиотиков и метаболитов фталата в моче: пилотное исследование с «Temple Останься». Окружающая среда. Рез. 2010; 110:375–382. [PubMed] [Академия Google]

24. Ji K., Kho Y., Park C., Paek D., Ryu P., Paek D. Влияние потребления воды и пищи на непреднамеренный прием антибиотиков среди населения в целом. Окружающая среда. Рез. 2010; 110:641–649. [PubMed] [Google Scholar]

25. Кокс Л.М., Яманиши С., Сон Дж., Алексеенко А.В., Леунг Дж.М., Чо И. Изменение кишечной микробиоты во время критического окна развития имеет длительные метаболические последствия. Клетка. 2014; 158:705–721. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

26. Кокс Л. М., Блазер М. Дж. Антибиотики в раннем возрасте и ожирение. Нац. Преподобный Эндокринол. 2015; 11: 182–190. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

27. Райт Г. Д. Антибиотический резистом: связь химического и генетического разнообразия. Нац. Преподобный Микробиолог. 2007; 5: 175–186. [PubMed] [Google Scholar]

28. Ормерод А.Д., Рейд Т.М.С., Мейн Р.А. Пенициллин в молоке — его значение при крапивнице. клин. Эксп. Аллергия. 1987; 17: 229–234. [PubMed] [Google Scholar]

29. Памфри Р.Ш. Уроки лечения анафилаксии из изучения фатальных реакций. клин. Эксп. Аллергия. 2000;30:1144–1150. [PubMed] [Академия Google]

30. Chafer-Pericás C., Maquieira A., Puchades R. Методы быстрого скрининга для обнаружения остаточных количеств антибиотиков в образцах пищевых продуктов. Анализ тенденций TrAC. хим. (Справочное издание) 2010; 29: 1038–1049. [Google Scholar]

31. Бенито-Пенья Э., Уррака Дж.Л., Морено-Бонди М.К. Количественное определение пенициллина V и амоксициллина в образцах кормов методом жидкостной экстракции под давлением и жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым обнаружением. Дж. Фармасьют. Биомед. Анальный. 2009; 49: 289–294. [PubMed] [Академия Google]

32. Гарсия-Кампанья А.М., Гамис-Грация Л., Лара Ф.Дж., Дель Олмо Ируэла М., Крусес-Бланко С. Применение капиллярного электрофореза для определения антибиотиков в пищевых продуктах и ​​образцах окружающей среды. Анальный. Биоанал. хим. 2009; 395:967–986. [PubMed] [Google Scholar]

33. Янк Л., Мартинс М.Т., Арсанд Дж.Б., Мотта Т.М.С., Фейхо Т.С., душ Сантос Кастильос Т. Жидкостная хроматография — многоклассовый метод тандемной масс-спектрометрии для 46 остатков антибиотиков в молоке и мясе: разработка и проверка. Анал с едой. Мет. 2017;10:2152–2164. [Академия Google]

34. ОКЭПД. Соединение . 2012 г. Совещание экспертов ФАО/ВОЗ по методологиям оценки воздействия остатков ветеринарных препаратов на рацион питания. Заключительный отчет, включая отчет совещания заинтересованных сторон. [Google Scholar]

35. Тычковска К., Войкснер Р.Д., Аросон А.Л. Разработка аналитического метода пеницилирования в коровьем молоке методом жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым-видимым детектированием и подтверждением масс-спектрометрическим детектированием. Ж. Хроматогр. Б Биомед. науч. заявл. 1989; 490:101–113. [PubMed] [Академия Google]

36. Ван Л., Ли Ю.К. Одновременное определение остатков десяти антибиотиков в молоке методом УЭЖХ. Хроматография. 2009; 70: 253–258. [Google Scholar]

37. Озден Т., Юрцевер Сарица Д. Том. 24. 2000. Высокоэффективное жидкостное хроматографическое определение остатка окситетрациклина в вяленых мясных продуктах. [Google Scholar]

38. Сенданойе М. Валидация метода ВЭЖХ-УФ для определения тригидрата амоксициллина в капсуле. Анна. Доп. хим. 2018: 55–72. [Академия Google]

39. Juan C., Moltó J.C., Mañes J., Font G. Определение макролидных и линкозамидных антибиотиков жидкостной экстракцией под давлением и жидкостной хроматографией-тандемной масс-спектрометрией в мясе и молоке. Питание Контр. 2010;21:1703–1709. [Google Scholar]

40. ДЛС. Животноводство — отдел животноводства Услуги 2020. http://www.dls.gov.bd/site/page/22b1143b-9323-44f8-bfd8-647087828c9b/Livestock-Economy

41. Приемлемый A.P.V.M.A. Суточная доза сельскохозяйственных и ветеринарных химикатов | Австралийское управление по пестицидам и ветеринарным препаратам, 2016 г. https://apvma.gov. au/node/2659.6

42. Бари М.С., Кобер А.Х., Хок М., Дебнат Г.К., Чанда Г.К. Распространенность остаточных количеств антибиотиков и связанные с ними факторы риска в молоке в Читтагонге, Бангладеш. Доп. Аним. Вет. науч. 2020;8 [Google Scholar]

43. Аалипур Ф., Мирлохи М., Джалали М., Азадбахт Л. Диетическое воздействие остатков тетрациклина при употреблении молока в Иране. Дж. Окружающая среда. Лечить. науч. англ. 2015;13 [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

44. Хасхели М., Малик Р.С., Араин М.А., Соомро А.Х., Араин Х.Х. Обнаружение остатков β-лактамных антибиотиков в товарном молоке. Пакистан Дж. Нутр. 2008; 7: 682–685. [Академия Google]

45. Келлнерова Е., Навратилова П., Борковцова И. Влияние пастеризации на остаточные количества тетрациклинов в молоке. Акта. Вет. Брно. 2014;83:21–26. [Google Scholar]

46. Zhang Y., Zheng N., Han R., Zheng B., Yu Z., Control S.L.-F. Наличие тетрациклинов, сульфаниламидов, сульфаметазинов и хинолонов в пастеризованном молоке и ультрапастеризованном молоке на рынке Китая. Эльзевир. 2014; 36: 238–242. [Google Scholar]

47. Аббаси М.М., Бабаи Х., Ансарин М., др. Одновременное определение остатков тетрациклинов в пробах коровьего молока методами твердофазной экстракции и ВЭЖХ-ФЛ. Доп. Фармацевт. Бык. 2011;1:34. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

48. Movassagh M.H., Karami A.R., др. Определение остаточных количеств антибиотиков в коровьем молоке в Тебризе, Иран. Глобальный ветеринар. 2010;5:195–197. [Google Scholar]

49. Ghidini S., Zanardi E., Chizzolini R., Varisco G. Распространенность молекул бета-лактамных антибиотиков в коровьем молоке в Ломбардии и Эмилии-Романье (Италия) Ann. Делла Фак. Мед. Вет. Стад. Ди Парма. 2002 [Google Scholar]

50. Элизабета Д.-С., Зехра Х.-М., Биляна С.-Д., Павле С., Ристо У. Скрининг остатков ветеринарных препаратов в молоке с индивидуальных ферм в Македонии. Макед. Вет. 2011; 34:5–13. [Академия Google]

51. Сыит Д.А. Обнаружение и определение уровней остаточных количеств окситетрациклина и антибиотиков пенициллинового ряда в коровьем молоке молочных ферм в Дебрезейте и Назарете. проц. 1-й междунар. Технол. Образовательный Окружающая среда. конф. Африканская соц. науч. Рез. 2011 [Google Scholar]

52. Лупинду А. М., Далсгаард А., Мсоффе П. Л. М., Нгови Х. А., Мтамбо М. М., Олсен Дж. Э. Передача устойчивой к антибиотикам кишечной палочки между крупным рогатым скотом, людьми и окружающей средой в пригородных животноводческих сообществах в Морогоро. , Танзания. Пред. Вет. Мед. 2015; 118: 477–482. [PubMed] [Академия Google]

53. ВОЗ Устойчивость к антибиотикам 2020. https://www.who.int/en/news-room/fact-sheets/detail/antibiotic-resistance

54. Врагович Н., Бажулич Д., Ньяри Б. Риск оценка остатков стрептомицина и тетрациклина в мясе и молоке на рынке Хорватии. Пищевая хим. Токсикол. 2011;49:352–355. [PubMed] [Google Scholar]

55. Биланджич Н., Коланович Б.С., Варенина И., Юркович З. Том. 61. 2011. Остатки ветеринарных препаратов в молоке. [Google Scholar]

56. Чаухан С.Л., Джадхав В.Дж., Гарг С.Р. Оценка воздействия остатков тетрациклина в молоке с пищей в Харьяне. Междунар. Дж. Хим. Стад. 1862; 7: 1862–1865. 2019. [Google Scholar]

Обнаружение остатков ветеринарных противомикробных препаратов в молоке с помощью абсорбционной спектроскопии в ближнем инфракрасном диапазоне инфракрасная спектроскопия. Были рассмотрены модельные и реальные образцы. Смоделированные учитывают добавление ветеринарных препаратов в пробы молока в следующих концентрациях: энрофлоксацин 100 

мкм г/л, террамицин 100  мкм г/л и пенициллин 4  мкм г/л. Статистический инструмент, использованный для различения образцов, представлял собой анализ основных компонентов (PCA). Наши результаты показывают, что с помощью этой экспериментальной процедуры можно различать различные типы противомикробных препаратов, растворенных в молоке. Кроме того, методология позволила обнаружить реальный образец дойки в разные дни после инъекции гидрохлорида цефтиофура, который, в принципе, является противомикробным средством с нулевым льготным периодом. Методология оказалась быстрой и точной в пределах максимальных пределов остатков, разрешенных Европейским агентством по лекарственным средствам и Министерством сельского хозяйства, животноводства и продовольственного снабжения Бразилии.

1. Введение

По данным Продовольственной и сельскохозяйственной организации Объединенных Наций, молоко является одним из наиболее потребляемых продуктов в мире. Это не только важно для уровня питания, но и играет важную роль в экономике. Мировое потребление молока и его производных превышает 6 млрд потребителей [1].

Молоко содержит белки, углеводы, липиды, минералы и витамины, которые выполняют важные биохимические и питательные функции, особенно для детей и пожилых людей. В коровьем молоке содержится около 87,1 % воды, 4,0 % жира, 3,3 % белка, 4,6 % лактозы и 0,7 % золы. Основное содержание белка в молоке составляет казеин 78,3%, сывороточный белок 19%, а другие в сумме 2,7 % [2, 3]. Что касается углеводов, то основным из них является лактоза. Состоящие из двух моносахаридов, глюкозы и галактозы, они выполняют важные питательные функции, такие как обеспечение людей энергией в количестве 16,8 кДж/г [4, 5]. Молоко и молочные продукты считаются хорошим источником кальция из-за его высокой биодоступности. Под последней можно понимать ту долю поглощаемых питательных веществ и пищи, которая усваивается и используется в физиологических и нормальных метаболических функциях и запасании [6, 7]. Хотя потенциальные возможности молока в качестве пищи несомненны, существуют ограничения на его потребление у людей с аллергией на лактозу и казеин.

О фальсификациях молока часто сообщалось в развивающихся странах, таких как Пакистан, Бразилия, Индия и Китай [8]. В основном цель состоит в том, чтобы увеличить объем за счет добавления воды [9]. Однако существуют и другие проблемы, такие как загрязнение молока остатками ветеринарных препаратов, которые могут присутствовать при доении коровы в льготный период. Наиболее распространенными препаратами являются противомикробные и противовоспалительные средства. Они широко используются для лечения болезней молочного скота, таких как мастит, диарея и заболевания легких, а также для профилактики и контроля или для увеличения продуктивности и роста животных [10–13]. Исследование, проведенное Van Boeckel et al. показали, что в период с 2000 по 2010 год потребление антибиотиков населением мира увеличилось на 36% и связано с появлением устойчивых к лекарствам бактерий. Из этой суммы 76% в основном приходится на страны, входящие в БРИКС (Бразилия, Россия, Индия, Китай и ЮАР). Часть этого увеличения связана с употреблением в пищу животных или их пищевых производных, загрязненных антибиотиками [14].

Чрезмерное употребление наркотиков молочным стадом приводит к обнаружению следов в молоке. Когда их концентрации превышают максимально допустимый уровень остатков (MRL), они могут нанести вред здоровью потребителя, начиная от аллергических реакций и заканчивая бактериальной резистентностью [13]. Загрязненное молоко вредно для здоровья и должно быть утилизировано [11, 15, 16]. В 2014 году Ван Бокель и соавт. связывал чрезмерное использование антибиотиков у животных с появлением супербактерий у людей. Чтобы контролировать содержание молока, регулирующие органы используют различные аналитические методы для обнаружения следов антибиотиков в молоке, такие как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), газовая хроматография в сочетании с масс-спектроскопией (CG-MS) и антимикробные методы. комплекты обнаружения. Тем не менее, в их использовании есть недостатки, такие как подготовка проб, квалифицированный персонал, сложные процедуры, трудоемкость и высокая стоимость. Кроме того, обычно тесты антибиотиков специфичны для класса противомикробных препаратов.

Поиски высокочувствительных методов, позволяющих обнаруживать остатки антибиотиков в молоке, ведутся десятилетиями. В 1996 году Verdon и Couedor использовали метод ВЭЖХ с обращенной фазой для определения остатков ампициллина, который способен обнаруживать 3  μ г/л и количественно определять до 10  μ г/л препарата [17]. В 2002 году Сивакесава и Ирудаярадж провели исследование, показывающее возможность измерения тетрациклина на уровнях мк г/л с помощью спектроскопии ближнего инфракрасного диапазона с преобразованием Фурье (FT-NIR) и спектроскопии с преобразованием Фурье в среднем инфракрасном диапазоне (FT-MIR). Тем не менее, они сообщили о высоких ошибках прогноза и предложили, чтобы методология была подтверждена на естественно загрязненных образцах и других остатках наркотиков [18]. В 2003 году Янковска и Сустова использовали FT-NIR для анализа коровьего молока. Однако методика использовалась для описания физико-химических характеристик молока. Кроме того, для разработки калибровочных моделей для исследуемых компонентов молока использовалась регрессия частичного наименьших квадратов (PLS). Благодаря этим результатам они предполагают, что NIR-спектроскопия применима для экспресс-анализа состава молока [19].]. В 2010 г. Brandão et al. изучали концентрацию жира в образцах молока с помощью неинвазивных методов, поглощения FT-IR и FT-NIR. Они пришли к выводу, что длину волны 2308 нм можно использовать для определения содержания жира в молоке без влияния других компонентов [20]. В 2014 году Чжан и соавт. [21] исследовали ультрапастеризованное и пастеризованное молоко на наличие остатков тетрациклинов, сульфаниламидов, сульфаметазина и хинолонов. Образцы молока были собраны в густонаселенных городах Китая и проанализированы с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Никакие остатки ветеринарных препаратов не превышают MRL, установленные Китаем, Европейским Союзом и CAC (Комиссия Codex Alimentarius). Тем не менее, из-за большого количества остатков в молоке они рекомендовали строго применять механизмы контроля, чтобы поддерживать эти остатки на безопасном уровне. В 2015 году Мохарана и соавт. [22] проанализировали ветеринарный препарат энрофлоксацин в образцах коровьего молока, полученных из двух городов Индии. По мнению авторов, энрофлоксацин является наиболее широко используемым препаратом в ветеринарной практике. Для анализа образцов они использовали обращенно-фазовую ВЭЖХ. С пределом обнаружения 100  μ г/л, они подтвердили, что 8% образцов имели значения выше MRL. Из краткого исторического обзора, описанного выше, становится ясно, что необходимы более глубокие исследования с целью изучения пределов обнаружения, охвата более крупных классов антибиотиков и анализа реальных образцов.

Эта работа посвящена спектроскопии с преобразованием Фурье в ближней инфракрасной области (FT-NIR), связанной с анализом основных компонентов (PCA) для обнаружения следов ветеринарных противомикробных препаратов (энрофлоксацин, террамицин, пенициллин и гидрохлорид цефтиофура) ниже MRL, разрешенного законодательством Европейское агентство по лекарственным средствам (EMEA), принятое в Бразилии Министерством сельского хозяйства, животноводства и продовольственного снабжения (MAPA) [23]. Обнаружение цефтиофура гидрохлорида в молоке проводили в течение двух дней подряд после введения препарата животному.

2. Материалы и методы

Анализы проводились в Лаборатории процессов и продуктов (LPP) и в Лаборатории спектроскопии материалов (LEM), расположенных на физическом факультете Федерального университета Жуиз-де-Фора, Бразилия.

2.1. Образцы молока

Некоторые образцы, использованные в этой работе, представляли собой сырое молоко коров, не получавших лекарства. Они были собраны на ферме, расположенной в городе Рио-Помба, штат Миннесота, Бразилия, рядом с лабораторией. После дойки образцы сырого молока немедленно хранили в холодильнике при 5°C до проведения анализа, который проводился примерно через час. Образцы подвергались химико-физическому анализу для проверки их соответствия установленным стандартам [24], то есть криоскопии, плотности, pH, кислотности (пробы Дорника и Ализарол), жира, белка, лактозы и сухих веществ [25–27]. ]. Каждое измерение проводили в трехкратной повторности. Результаты представлены в таблице 1.

2.2. Моделирование загрязнения

Первоначально были разделены две порции, одна в качестве контрольного образца, а другая в качестве самоконтролируемой с ветеринарным препаратом. Используемые препараты представляли собой противомикробные препараты: энрофлоксацин Байтрил® для инъекций 10%, в состав которого входит 10 г энрофлоксацина плюс 100 мл носителя, террамицин/LA Zoetis/Pfizer® для инъекций, содержащий 20 г окситетрациклина плюс 100 г носителя в своем составе. , и пентабиотик Pfizer, усиленный пенициллином.

Моделирование проводилось по действующему началу каждого препарата, а не по его объему. Точнее, в анализе с PCA различение зараженного молока в 90 121 μ 90 122 г/л осуществляется по действующему началу, MRL, как это предусмотрено законодательством, а не по лекарственному средству (вспомогательные вещества + активное начало). Для этого каждый ветеринарный препарат сначала разбавляли дистиллированной водой и, наконец, часть этого разведения добавляли в натуральное молоко, чтобы достичь концентрации активного начала в молоке. Значения, эквивалентные MRL, разрешенным EMEA и MAPA для противомикробных препаратов и их метаболитов, следующие: 100  мк г/л к энрофлоксацину, 100  мк г/л к террамицину и 4  мк г/л к пенициллину [22, 28, 29]. Эта методология ранее применялась к противовоспалительному диклофенаку натрия [30].

2.3. Настоящие загрязненные пробы

Сначала молоко, свободное от наркотиков, было собрано у коровы, использовавшейся в качестве контроля. Затем корове вводили инъекционный препарат Цеф-50 Цефтиофур Агнер Юнион, в состав которого входит 50 г гидрохлорида цефтиофура плюс 1 мл носителя. Этот препарат не имеет льготного периода. Затем молоко собирают два дня подряд. Все образцы были немедленно помещены на хранение и хранились в холодильнике при 5°C до проведения анализа, который был проведен приблизительно через один час.

2.4. Анализ с использованием метода FT-NIR

Анализы образцов проводились с помощью многоцелевого анализатора FT-NIR от Bruker, работающего в режиме отражения в диапазоне от 13,500 до 3,700 см −1 волновых чисел с детектором Te-InGaAs и 4 см −1 разрешения. Для сбора данных использовалось программное обеспечение OPUS® версии 5.5. Образцы помещали в боросиликатные кюветы толщиной 8 мм. Каждый анализ был выполнен в трех повторах с 32 сканированиями для моделируемых и контрольных образцов.

2.5. Статистический анализ

Спектры отражения и их первые производные были получены и проанализированы с помощью программного обеспечения OriginPro®8 SR2 v.8.0891(B891). Собственные значения рассчитаны с помощью программы BioStat версии 5.3. Анализ главных компонентов проводился с помощью программы The Unscrambler® X версии 10.3.

3. Результаты

В таблице 1 показаны средние результаты, полученные для параметров качества молока образцов и эталонного значения, установленного бразильской нормативной инструкцией 62 от MAPA и FAO/TCP/KEN/6611 [24]. Результаты находятся в пределах, принятых законодательством.

На рис. 1 показаны спектры отражения (вверху) и их первые производные (внизу) натурального молока и чистых противомикробных препаратов. Из рисунка видно, что спектры сильно отличаются друг от друга прежде всего в первых производных.

На рис. 2 показаны спектры отражения (вверху) и их первые производные (внизу) образцов настоящего и зараженного молока в пределах MRL. В отличие от рисунка 1, теперь различия между спектральными профилями не очевидны из-за очень низкой концентрации антибиотиков. Поэтому приходится полагаться на статистическую модель. Это будет достигнуто с помощью PCA для различения контрольных и фальсифицированных образцов молока.

Главная компонента набора данных (размерность) получается с помощью анализа, заключающегося в нахождении собственных значений ковариационной матрицы [31]. Каждый собственный вектор имеет соответствующее собственное значение. Собственные векторы с более высокими собственными значениями являются главными компонентами и упорядочиваются от более высоких к меньшим, задавая компоненты по степени значимости [32]. В таблице 2 показаны объясненные и кумулятивные отклонения основных компонентов проб настоящего и зараженного молока в пределах MRL.

На рис. 3 показана диаграмма показателей с кластеризацией образцов молока: контроль (GEN1, GEN2, GEN3), загрязненный 100  мк г/л энрофлоксацина (EN100.1, EN100.2, EN100.3), загрязненный со 100  мк г/л террамицина (TE100.1, TE100.2, TE100.3) и контаминированным 4  мк г/л пенициллина (PE4.1, PE4.2, PE4.3).

Из рис. 3 видно, что формирование кластеров происходит из-за высокой степени сходства между группами образцов. Присутствуют четыре группы, по одной в каждом квадранте. Группа 1 (квадраты) относится к натуральному молоку (контрольные образцы) и располагается в первом квадранте. Группа 2 расположена во втором квадранте (кружки). Этот кластер представляет собой группу загрязненных образцов молока с 4  мк г/л пенициллина. Третий квадрант содержит элементы группы 3, которая относится к образцам контаминированного молока с содержанием энрофлоксацина 100  мк г/л (треугольники), а четвертый квадрант занимает группа 4 (ромбы), содержащая образцы контаминированного молока с содержанием 100  мк г/л. г/л террамицина. Среди элементов групп ни один не находится далеко друг от друга, что исключает наличие выбросов. PCA точно разделил образцы на группы, несмотря на очень низкую концентрацию противомикробных препаратов. Из PC1 видно, что пенициллин и энрофлоксацин имеют одинаковую оценку в отличие от террамицина и натурального молока. Эту тенденцию можно отразить в спектрах поглощения (рис. 2). Таким образом, PC1 представляет собой степень загрязнения молока антибиотиками. Обратите внимание, что группа данных, содержащих натуральное молоко, расположена близко к центру оси. Загрязненные кластеры имеют разное расстояние и разное положение от центра. Это связано с тем, что концентрации препаратов разные. Например, образцы с 100  9Аналогичное положение занимают 0121 мк г/л препарата (группы 3 и 4). Из приведенных выше рассуждений мы приходим к выводу, что PC2 связан с подобием молока.

Все образцы, проанализированные до сих пор, были сырым молоком. Что касается чистых данных по противомикробным препаратам, можно убедиться, что PCA также способен различать их. На рис. 4 показан такой факт. На ней показана PCA средних значений спектров отражения натурального молока, чистого энрофлоксацина, чистого террамицина, чистого пенициллина и молока-энрофлоксацина в 100  мк г/л, молоко-террамицин в 100  мк г/л и молоко-пенициллин в 4  мк г/л соответственно. Видно, что молокообразные образцы (GEN, EN100, TE100 и PE4) расположены очень близко по отношению к PC1, что указывает на степень сходства между ними (кластерообразование). По этой причине образцы энрофлоксацинового противомикробного препарата (ЭНР), пенициллинового противомикробного препарата (ПЕН) и террамицинового противомикробного препарата (ТЭР) так далеки от группы. Образец чистого пенициллина отделен от других кластеров, потому что это была единственная твердая матрица (порошок), а остальные были жидкими.

В таблице 3 показаны объясненные и кумулятивные отклонения для каждого из основных компонентов средних значений чистого энрофлоксацина, чистого террамицина, чистого пенициллина, натурального молока, молока-энрофлоксацина и молока-террамицина в 100  мк г/л каждого, и молоко-пенициллин в 4  мк г/л.

На рис. 5 показана методика, применяемая в реальной ситуации. Приведены данные о контрольном молоке без лекарств и загрязненном молоке в течение двух дней подряд после введения корове препарата гидрохлорида цефтиофура. В Таблице 4 представлены соответствующие объясненные и кумулятивные отклонения от данных Рисунка 5.

Образование кластеров наблюдалось для натурального молока (GEN1, GEN 2 и GEN3) и молока однодневного и двухдневного введения лекарственного средства (1DAY и 2DAY). Выяснилось, что группы GEN и 2DAY расположены вдоль одного и того же ПК1, что свидетельствует о сходстве между группами. Это связано с метаболизацией антибиотика у дойной коровы после двух дней введения препарата. Подкрепление этого предположения становится очевидным при сравнении с однодневной дойкой с натуральным молоком. PC2 связан со временем доения, так как спектроскопические измерения проводились после последнего дня доения (2DAY).

4. Выводы

В этой статье речь шла об идентификации противомикробных препаратов энрофлоксацина, террамицина, пенициллина и цефтиофура в образцах молока в МДУ, разрешенном регулирующими органами. Разработанная методология основана на сочетании спектроскопии ближней инфракрасной области с преобразованием Фурье (FT-NIR) и анализа главных компонентов (PCA). Экспериментальная процедура позволила быстро и точно обнаружить следы антибиотиков. Методика применялась также для обнаружения цефтиофура гидрохлорида в молоке коровы, которой вводили препарат. Помимо обнаружения следов, мы также можем проследить процесс метаболизма в организме животного. Наши результаты наглядно демонстрируют возможности метода для разработки портативного прототипа.

Доступность данных

Данные, использованные для поддержки результатов этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в связи с публикацией данной статьи.

Благодарности

Авторы благодарят бразильские финансовые агентства CAPES (PNPD 2871/2011), CNPq (309100/2016-0) и FAPEMIG (MPR 00004-13 и MPR 01068/16) за финансирование. Leandro da Conceição Luiz благодарит химический факультет Сельского федерального университета Рио-де-Жанейро, Бразилия, за доступ к программе The Unscrambler.

Ссылки
  1. ФАО/ВОЗ, Молочное производство и продукты: молоко и молочные продукты , 2017. Бока-Ратон, Флорида, США, 2-е издание, 2006 г.

  2. В. К. Таванти, Л. Г. Басси, Г. К. С. Феррейра и др., «Composição e capacidade de coagulação de leites de caucas holandesas e girolandas», Revisndic Cânito Laido Inosstituto Тосты , том. 370, нет. 64, стр. 5–9, 2009.

    Посмотреть по адресу:

    Google Scholar

  3. Продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций (ФАО), Food Energy—Methods of Analysis and Conversion Factors , Chapter 3, Food и сельскохозяйственной организации Объединенных Наций, Рим, Италия, 2003 г.

  4. М. К. С. Перейра, Л. П. Брумано, К. М. Камияма, Х. П. Ф. Перейра, М. П. Родарте и М. А. О. Пинто, «Lácteos com baixo teor de lactose: uma necessidade para portes переваривать лактозу и никола де меркадо», Revista do Instituto de Laticínios Cândido Tostes , vol. 67, нет. 389, стр. 57–65, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  5. R. S. Gibson, L. Perlas, and C. Hotz, «Улучшение биодоступности питательных веществ в растительных продуктах на бытовом уровне», Proceedings of the Nutrition Society , vol. 65, нет. 2, стр. 160–168, 2006 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  6. Дж. М. Карбонелл-Капелла, М. Буниовска, Ф. Дж. Барба, М. Дж. Эстев и А. Фригола, «Аналитические методы определения биодоступности и биодоступности биоактивных соединений из фруктов и овощей: обзор», Всеобъемлющие обзоры по науке о пищевых продуктах и ​​безопасности пищевых продуктов , vol. 13, нет. 2, стр. 155–171, 2014 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  7. К. Э. Хэндфорд, К. Кэмпбелл и К. Т. Эллиотт, «Влияние мошенничества с молоком на безопасность пищевых продуктов и питание с особым акцентом на развивающиеся страны», Всеобъемлющие обзоры в области пищевых наук и безопасности пищевых продуктов , том. 15, нет. 1, стр. 130–142, 2016 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Академия Google

  8. W.W.G. Nascimento, MPF. Souza, A.C.M.M. Valente, V. Anjos, M.A.M. Furtado и M.J.V. Bell, «Результаты портативного и недорогого оборудования, разработанного для обнаружения фальсификации молока», Food Science and Technology , vol. 37, стр. 38–41, 2017 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  9. M. A. V. P. Brito and C. C. Lange, Resíduos de Antibióticos no Leite , Comunicado Técnico 44, Embrapa, Brasília, Federal District, Brazil, 2005.

  10. D. Pontes Netto, M. O. Lopes, M. C. S. Oliveira et al., «Levantamento dos principais farmacos utilizados no rebanho leiteiro do Estado do Paraná», Acta Scientiarum. Науки о животных , том. 27, нет. 1, стр. 145–151, 2005 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  11. Т. Ф. Ландерс, Б. Коэн, Т. Е. Виттум и Э. Л. Ларсон, «Обзор использования антибиотиков у пищевых животных: перспектива, политика и потенциал», Public Health Reports , том. 127, нет. 1, стр. 4–22, 2012 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  12. R. W. Han, N. Zheng, Z. N. Yu et al., «Одновременное определение 38 остатков ветеринарных антибиотиков в сыром молоке с помощью UPLC-MS/MS», Food Chemistry , vol. 181, стр. 119–126, 2015.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  13. Т. П. Ван Бекель, С. Гандра, А. Ашок и др., «Глобальное потребление антибиотиков с 2000 по 2010 год: анализ национальных данных о продажах фармацевтических препаратов», стр. The Lancet Infectious Diseases , vol. 14, нет. 8, стр. 742–750, 2014.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  14. S. J. Forsythe, Microbiologia da Segurança Alimentar , ArtMed, Porto Alegre, RS, Brazil, 2002.

  15. L. Redding, R. R. Пенсильванский университет, Филадельфия, Пенсильвания, США, 2014 г., общедоступный документ Penn Dissertations Paper 1414.

  16. E. Verdon и P. Couedor, «Определение остатков ампициллина в молоке с помощью ионно-парной обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии после предколоночной дериватизации», Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis , vol. 14, нет. 8–10, стр. 1201–1207, 1996.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  17. S. Sivakesava и J. Irudayaraj, «Быстрое определение тетрациклина в молоке с помощью FT-MIR и FT-NIR спектроскопии», Journal of Dairy Science , vol. 85, нет. 3, стр. 487–449, 2002.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  18. Р. Янковска и К. Сустова, «Анализ коровьего молока с помощью спектроскопии в ближней инфракрасной области», Чешский журнал пищевых наук, , том. 21, нет. 4, стр. 123–128, 2011.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  19. М. К. М. П. Брандао, А. П. Кармо, М. Дж. В. Белл и В. К. Анжос, «Характеристика молока с помощью инфракрасной спектроскопии», стр. 9. 0121 Revista do Instituto de Laticínios Cândido Tostes , vol. 373, нет. 65, стр. 30–33, 2010.

    Просмотр по адресу:

    Google Scholar

  20. Чжан Ю.Д., Чжэн Н., Хан Р.В. Ультрапастеризованное молоко на рынке Китая», Food Control , vol. 36, нет. 1, стр. 238–242, 2014 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  21. Б. Мохарана, П. К. Венкатеш, С. П. Прита и С. Сельвасубраманиан, «Количественная оценка остатков энрофлоксацина в образце молока с использованием ОФ-ВЭЖХ», Всемирный журнал фармации и фармацевтических наук , том. 4, нет. 10, pp. 1443–1450, 2015.

    Посмотреть по адресу:

    Google Scholar

  22. EMEA, Европейское агентство по оценке лекарственных средств: ветеринарные препараты и инспекции , Комитет по ветеринарным препаратам Enfloxacal: EMEA, Лондон, Великобритания, 2002 г.

  23. Проект FAO/TCP/KEN/6611, Анализ молока и контроль качества , Руководство по переработке молока, серия V2.

  24. Продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций (ФАО), Анализ молока .

  25. A. F. Bodenmüller, J. C. Damasceno, I. T. S. Previdelli, R. G. Santana, C. E. CO. 39, нет. 8, стр. 1832–1839, 2010.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  26. М. С. Робим, Avaliação de Diferentes Marcas de Leite UAT Comercializadas no Estado do Rio de Janeiro e o Efeito da Fraude por Aguagem na Fabricação, Composição e Analise Sensorial de Iogurte , Федеральный университет Флуминенсе, Нитерой, Бразилия, 2011, Dissertação.

  27. E. Pacheco-Silva, J.R. Souza и E.D. Caldas, «Resíduos de medicamentos veterinários em leite e ovos», Química Nova , vol. 37, нет. 1, стр. 111–122, 2014 г.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Академия Google

  28. A. M. Mangerona, O. D. Mozzer, R.F. Vieira, C.R. Dias и D. R. Cappelini, «Comparação do Período de Carência ecidos e Leite Bovino Apprios Administrys eclofeneRemoS11». A Hora Veterinária , vol. 33, нет. 196, 2013.

    View at:

    Google Scholar

  29. L. C. Luiz, M.J. V. Bell, R. A. Rocha, T. O. Mendes и V. C. Anjos, «Análise de retyduos declofenaco sódico veterry -meashomy -measopema -measopema -omeite -measopema -measopema -ome Revista Brasileira de Ciências da Saúde , vol. 18, нет. 3, стр. 219–224, 2014.

    Посмотреть по адресу:

    Сайт издателя | Google Scholar

  30. Р. Э. Сантос, «Анализ главных компонентов, применяемый к сжатию цифровых изображений», Einstein , vol.